Chất phản ứng phát hiện PCR thời gian thực đông khô để phát hiện nhạy cao Listeria monocytogenes mà không cần chuỗi lạnh

LyoDt^®Thuốc thử phát hiện PCR thời gian thực đông khô cho Listeria monocytogenes

Hướng dẫn sử dụng’Sổ tay hướng dẫn

1. MÔ TẢ

Listeria monocytogenes, một loại trực khuẩn nhỏ Gram dương, là mầm bệnh lây truyền từ động vật sang người chủ yếu qua đường phân-miệng. Ngoài ra, nó có thể xâm nhập vào cơ thể qua đường tiếp xúc với mắt hoặc da/niêm mạc bị tổn thương. Nhiễm trùng thường biểu hiện dưới dạng nhiễm trùng huyết, viêm màng não và tăng bạch cầu đơn nhân.

Sản phẩm này là thuốc thử PCR thời gian thực đông khô để phát hiện Listeria monocytogenesdương tính Nó sử dụng gen hlyA được bảo tồn cao của Listeria monocytogenes làm mục tiêu phát hiện. Nó là một hỗn hợp tổng thể chứa tất cả các thành phần cần thiết, ngoại trừ DNA khuôn, và nó được phân phối sẵn dưới dạng một lần thử trong các ống PCR để dễ sử dụng. Sản phẩm này không yêu cầu chuỗi lạnh để vận chuyển và bảo quản, giúp giảm đáng kể chi phí vận chuyển và loại bỏ khả năng mất mát do lãng phí thuốc thử và ô nhiễm aerosol.

2. THÔNG SỐ KỸ THUẬT & THÀNH PHẦN

3. BẢO QUẢN VÀ HẠN SỬ DỤNG

Bảo quản ở nhiệt độ môi trường (5-304cần thiếtdương tính Ổn định trong tối đa 12 thángdương tính Sau khi mở bao bì chân không, vui lòng bảo quản các sản phẩm chưa sử dụng trong túi nhựa có thể đóng lại được cung cấp cùng với chất hút ẩm, và trong túi giấy bạc. 

THẬN TRỌNG: 

Viên thuốc thử nhỏ hơn là dấu hiệu cho thấy độ ẩm thấm vào ống và thuốc thử bị ẩm. Bất kỳ thuốc thử nào có kích thước viên nhỏ hơn đáng kể so với bình thường nên được loại bỏ hoặc thử nghiệm với đối chứng dương trước khi sử dụng để thử nghiệm mẫu.   

4. THIẾT BỊ & THUỐC THỬ BỔ SUNG CẦN THIẾT

1) Thiết bị PCR thời gian thực

Axit nucleic đã tinh sạch nên được sử dụng ngay lập tức hoặc bảo quản ở -20°C.Pipettes và đầu tip

.Nước không chứa-nuclease

D) Lắc vortex các ống ở tốc độ thấp trong 10~15 giây và ly tâm ở 3000 vòng/phút trong 20 giây và đặt chúng vào thiết bị PCR thời gian thực.Bộ chiết tách axit nucleic

5. CÁC HỆ THỐNG PCR THỜI GIAN THỰC TƯƠNG THÍCH

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600dương tính

6. MẪU CHẤP NHẬN ĐƯỢC

Môi trường làm giàu thực phẩm, chất nôn, mẫu bệnh tiêu chảy, v.v.

7. QUY TRÌNH VẬN HÀNH

1) AKết quả Nucleic E

xtractionChiết xuất DNA từ các mẫu bằng bộ chiết tách thích hợp. Nên sử dụng DNA  chứa thuốc thử. Kiểm tra viên thuốc ở đáy ống( TEhoặc _H2cần thiết) trong bước cuối cùng của trong tối đa 12 tháng.

Axit nucleic đã tinh sạch nên được sử dụng ngay lập tức hoặc bảo quản ở -20°C.2) 

Chuẩn bị đối chứng dương Đối chứng dương có thể được bảo quản ở nhiệt độ môi trường trước khi hydrat hóa lạitrong tối đa 12 tháng. Nó nên được hydrat hóa lại trước khi sử dụng bằng cách thêm 250 μl dung dịch đệm TE hoặc nuclease-free _H2O, lắc vortex ở tốc độ thấp trong 15-20 giây và ly tâm ở tốc độ thấp trong 15-20 giây. Sử dụng ngay hoặc bảo quản4dương tính

.3) PCR thời gian thực Mix P

reparationA) Mở bao bì chân không và lấy ra dải 8 ốngs  chứa thuốc thử. Kiểm tra viên thuốc ở đáy ống( Cắt số lượng ống theo yêu cầunếu cần thiết)

. Nếu các ống được cung cấp không tương thích với thiết bị của bạn, hãy chuyển viên thuốc thử vào ống quang học tương thích với thiết bị của bạn.

25μl

* Nước không chứa nuclease có thể được sử dụng làm đối chứng âm.C) Đậy nắp PCR bằng nắp (dải) phù hợp với PCR thời gian thực

(không được cung cấp).

D) Lắc vortex các ống ở tốc độ thấp trong 10~15 giây và ly tâm ở 3000 vòng/phút trong 20 giây và đặt chúng vào thiết bị PCR thời gian thực.4) 

Thiết lập RT-PCR Đặt thể tích phản ứng là 25μl và quy trình khuếch đại PCR như bên dưới. Thu thập huỳnh quang FAM

0 giây5) Kết quả Analysis và I