Bộ thử nghiệm nhanh về an toàn thực phẩm cho Enterohemorrhagic Escherichia coli EHEC Khám phá bằng chất phản ứng PCR thời gian thực đông khô Không cần chuỗi lạnh

1.Mô tả

Escherichia coli xuất huyết(EHEC) là một nhómE. colicác chủng có khả năng gây tiêu chảy xuất huyết và viêm ruột ở người, với loại huyết thanh O157: H7 là chủng đại diện nhất.sữa thô, gia cầm và các sản phẩm từ đó, cũng như trái cây và rau quả, với thịt bò là phương tiện truyền thông chính.

Sản phẩm này là một phản ứng PCR thời gian thực đông khôđối với phát hiệnEscherichia coliO157:H7. Nó sử dụng các chất bảo quản cao rfbE gen củaEscherichia coliO157:H7 là mục tiêu phát hiện. Nó là một hỗn hợp chính chứa tất cả các thành phần cần thiết, ngoại trừ mẫu DNA, và nó được phân phối trước như một xét nghiệm duy nhất trong ống PCR để dễ sử dụng.Sản phẩm này không cần dây chuyền lạnh để vận chuyển và lưu trữ, làm giảm đáng kể chi phí vận chuyển và loại bỏ khả năng mất mát do lãng phí phản ứng và ô nhiễm khí phun.

2. Thông số kỹ thuật và thành phần

3. Lưu trữ Và thời hạn sử dụng

Lưu trữở nhiệt độ môi trường (5-30°C). Nó ổn định trong 12 tháng.. Sau khi đóng gói chân không được mở, vui lòng lưu trữ các sản phẩm không sử dụng trong túi nhựa có thể niêm phong lại được cung cấp với chất khô,vàtrong túi nhôm. 

Cảnh báo: 

Các viên thuốc phản ứng nhỏ hơn là một dấu hiệu của độ ẩm thấm vào ống và thuốc phản ứng được ẩm.Bất kỳ chất phản ứng nào có kích thước viên hạt nhỏ hơn đáng kể so với bình thường nên được loại bỏ hoặc thử nghiệm với kiểm soát tích cực trước khi sử dụng để kiểm tra mẫu.

4. Cần thiết bị và chất phản ứng bổ sung

1)Công cụ PCR thời gian thực

2)Pipcácvà mẹo

3)Nuclease-nước miễn phí

4)Bộ dụng cụ chiết xuất axit nucleic

5. Hệ thống PCR thời gian thực tương thích

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. Các mẫu chấp nhận được

Nước dùng làm giàu thực phẩm, nôn mửa, mẫu tiêu chảy, vv.

7. HOÀN HOÀN

1)Hạt nhânACIDExtraction

Chất chiết xuấtDNAtừ các mẫu bằng cách sử dụng bộ lọc thích hợp.Nó được khuyến cáo rằngDNAđược luộc với khoảng 100μl bộ đệm luộc(TE hoặcH không chứa nuclease₂O)trong bước cuối cùng củachiết xuất.Axit nucleic tinh khiết nên được sử dụng ngay lập tức hoặc lưu trữ ở nhiệt độ -20 °C.

2)Chuẩn bị kiểm soát tích cực

Kiểm soát tích cực có thể được lưu trữ ở nhiệt độ môi trường xung quanh trước khi tái ngậm nước trong thời gian tối đa 12 tháng.Nónên được tái hydrat trước khi sử dụngbằng cách thêm250μlcủa bộ đệm TE hoặc nkhông có ucleaseH₂Ôi,sử dụng ngay lập tức hoặc lưu trữở -20°C.

3)PCR thời gian thựcMIXPbồi thường

A) Mở gói chân không và lấy ra dải 8 ốngsKiểm tra viên đạn ở dưới cùng của ống (Giảm số lượng ống theo nhu cầu nếucần thiết)Nếu các ống cung cấp không tương thích với thiết bị của bạn, chuyển viên thuốc thử vào một ống quang tương thích với thiết bị của bạn.

B) Mở ống và vứt nắp (không phù hợp với máy PCR thời gian thực) và chuẩn bị hỗn hợp phản ứng trên băng như dưới đây.

* Nước không chứa nuclease có thể được sử dụng làm kiểm soát âm.

C)Tấm PCR bằng cách sử dụng các miếng miếng (dải) phù hợp với PCR thời gian thực(không được cung cấp).

D) Động các ống với tốc độ thấp trong 10 ~ 15sec, và ly tâm ở 3000rpm trong 20sec và đặt chúng vào một dụng cụ PCR thời gian thực.

4)Thiết lập RT-PCR

Đặt khối lượng phản ứng là 25μl và quy trình khuếch đại PCR như dưới đây. quang tỏa ở 60 °C, và chọn NONE làm tham chiếu thụ động.

5)Kết quảAphân tíchvàTôi...giải thích