LyoDt® Real-Time PCR Detection Kit For Salmonella Freeze - Dry Powder

 Bộ kit phát hiện Real-Time PCR LyoDt® cho Salmonella dạng bột đông khô

1. GIỚI THIỆU

Salmonella là một loại vi khuẩn đường ruột Gram âm và là mầm bệnh phổ biến qua thực phẩm. Những vi khuẩn này phân bố rộng rãi trong tự nhiên và thường xuyên xâm nhập vào ruột của người và động vật, đặc biệt là gia cầm, gia súc và vật nuôi. Các nguồn thực phẩm chính gây ô nhiễm Salmonella bao gồm: thịt và các sản phẩm từ thịt, trứng và các sản phẩm từ trứng, sữa và các sản phẩm từ sữa, v.v.

Sản phẩm này là thuốc thử Real-time PCR dạng đông khô để phát hiện Salmonella. Nó sử dụng gen invA có tính bảo tồn cao của Salmonella làm mục tiêu phát hiện. Đây là một hỗn hợp tổng thể chứa tất cả các thành phần cần thiết, ngoại trừ DNA khuôn, và nó được phân phối sẵn dưới dạng một lần thử nghiệm trong các ống PCR để dễ sử dụng. Sản phẩm này không yêu cầu chuỗi lạnh để vận chuyển và bảo quản, giúp giảm đáng kể chi phí vận chuyển và loại bỏ khả năng mất mát do lãng phí thuốc thử và ô nhiễm aerosol.

2. THÔNG SỐ KỸ THUẬT & THÀNH PHẦN

3. BẢO QUẢN VÀ HẠN SỬ DỤNG

Bảo quản ở nhiệt độ môi trường (5-30°C). Ổn định trong tối đa 12 tháng. Sau khi mở bao bì chân không, vui lòng bảo quản các sản phẩm chưa sử dụng trong túi nhựa có thể đóng lại được cung cấp cùng với chất hút ẩm và trong túi giấy bạc.

LƯU Ý:

Viên thuốc thử nhỏ hơn là dấu hiệu cho thấy độ ẩm thấm vào ống và thuốc thử bị ẩm. Bất kỳ thuốc thử nào có kích thước viên nhỏ hơn đáng kể so với bình thường nên được loại bỏ hoặc thử nghiệm với đối chứng dương trước khi sử dụng để thử nghiệm mẫu.

4. THIẾT BỊ & THUỐC THỬ BỔ SUNG CẦN THIẾT

1) Máy Real-time PCR

2) Pipet và đầu tip

3) Nước không chứa nuclease

4) Bộ kit chiết tách axit nucleic

5. CÁC HỆ THỐNG REAL-TIME PCR TƯƠNG THÍCH

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. MẪU VẬT CHẤP NHẬN ĐƯỢC

Môi trường làm giàu thực phẩm, chất nôn, mẫu bệnh tiêu chảy, v.v.

7. QUY TRÌNH VẬN HÀNH

1) Chiết tách axit nucleic

     Chiết tách DNA từ các mẫu vật bằng bộ kit chiết tách thích hợp. NênDNA được giải ly với khoảng 100μl dung dịch đệm giải ly  (TE hoặc H không chứa nuclease₂O) trong bước cuối cùng của chiết tách. Axit nucleic đã tinh sạch nên được sử dụng ngay lập tức hoặc bảo quản ở -20°C.

2) Chuẩn bị đối chứng dương

Đối chứng dương có thể được bảo quản ở nhiệt độ môi trường trước khi hydrat hóa lại trong tối đa 12 tháng. Nó nên được hydrat hóa lại trước khi sử dụng bằng cách thêm 250 μl dung dịch đệm TE hoặc H không chứa nuclease₂O, lắc vortex ở tốc độ thấp trong 15-20 giây và ly tâm ở tốc độ thấp trong 15-20 giây. Sử dụng ngay lập tức hoặc bảo quản ở -20°C.

3) Chuẩn bị hỗn hợp Real-Time PCR

A) Mở bao bì chân không và lấy ra các dải 8 ống chứa thuốc thử. Kiểm tra viên thuốc thử ở đáy ống (Cắt số lượng ống khi cần thiết). Nếu các ống được cung cấp không tương thích với thiết bị của bạn, hãy chuyển viên thuốc thử sang ống quang học tương thích với thiết bị của bạn.

B) Mở các ống và loại bỏ nắp (không thích hợp cho máy Real-time PCR) và chuẩn bị hỗn hợp phản ứng trên đá như sau.

* Nước không chứa nuclease có thể được sử dụng làm đối chứng âm.

C) Đậy nắp PCR bằng nắp (dải) thích hợp cho Real-time PCR (không được cung cấp).

D) Lắc vortex các ống ở tốc độ thấp trong 10~15 giây và ly tâm ở 3000 vòng/phút trong 20 giây và đặt chúng vào máy Real-time PCR.

2) Thiết lập RT-PCR

Đặt thể tích phản ứng là 25μl và quy trình khuếch đại PCR như sau. Thu thập huỳnh quang FAM ở 60°C và chọn KHÔNG làm tham chiếu thụ động.

3) Phân tích và giải thích kết quả